Histone Deacetylase 11 (HDAC11) Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402103-ACT

HDAC11 codifica a Histona Desacetilase 11, a única HDAC da classe IV, que modula a acessibilidade da cromatina e programas transcricionais por meio da desacetilação e de mecanismos relacionados de regulação de acil-lisina. Em células humanas, a HDAC11 participa do controle epigenético da diferenciação, da adaptação metabólica e da sinalização imune, ao influenciar substratos histônicos e não histônicos que se intersectam com vias inflamatórias e de resposta ao estresse. Alterações na atividade da HDAC11 têm sido associadas a padrões desregulados de expressão gênica relevantes para processos oncogênicos e para estados funcionais de células imunes. Como resultado, a HDAC11 é amplamente estudada em contextos em que o remodelamento da cromatina molda decisões de destino celular e redes transcricionais associadas a doenças.

Histone Deacetylase 11 (HDAC11) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HDAC11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Histone Deacetylase 11 (HDAC11) O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HDAC11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HDAC11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Histone Deacetylase 11 (HDAC11). Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HDAC11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Histone Deacetylase 11 (HDAC11) no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Histone Deacetylase 11 (HDAC11) em células tumorais com expressão de HDAC11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.