Plásmido CRISPR de Activación (m) Histone cluster 1 H3A: sc-436164-ACT

Hist1h3a codifica la histona del clúster 1 H3A, una proteína H3 canónica que forma el núcleo de los nucleosomas y ayuda a organizar la arquitectura de la cromatina en todo el genoma del ratón. Mediante modificaciones postraduccionales como la metilación y la acetilación, H3 integra señales que regulan programas transcripcionales, el momento de la replicación del ADN y la accesibilidad de la cromatina durante la progresión del ciclo celular y el desarrollo. La dinámica de la histona H3 contribuye a la herencia epigenética y coordina procesos clave, como el reconocimiento y la reparación del daño en el ADN, el ensamblaje de nucleosomas acoplado a la replicación y la formación de heterocromatina. La desregulación de la dosis de histonas o de los estados de modificación de H3 se asocia ampliamente con inestabilidad genómica y patrones anómalos de expresión génica observados en la biología del cáncer y en trastornos del desarrollo, lo que respalda a Hist1h3a como un nodo útil para la investigación en cromatina y epigenética.

Histone cluster 1 H3A El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Hist1h3a sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Histone cluster 1 H3A El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Hist1h3a en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Hist1h3a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Histone cluster 1 H3A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Hist1h3a y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Histone cluster 1 H3A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Histone cluster 1 H3A en células tumorales con expresión de Hist1h3a silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.