Plásmido CRISPR de Activación (h) Histatin 1: sc-416632-ACT

HTN1 codifica la histatina 1, un péptido rico en histidina secretado por las glándulas salivales que contribuye a la defensa innata y a la homeostasis de la mucosa en la cavidad oral. La histatina 1 participa en procesos antimicrobianos y ayuda a mantener la barrera epitelial, influyendo en la dinámica de los biofilms y en las interacciones huésped–microbio en la interfaz saliva–mucosa. A través de sus efectos sobre el crecimiento y la adhesión microbianos, así como sobre el tono inflamatorio local, HTN1 es relevante para estudios sobre la regulación del microbioma oral y las respuestas al estrés en células epiteliales y glandulares. La composición alterada de los péptidos salivales, incluidos los miembros de la familia de las histatinas, se evalúa con frecuencia en afecciones que afectan la salud oral y la función glandular, lo que impulsa investigaciones mecanísticas sobre la regulación de HTN1.

Histatin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HTN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Histatin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HTN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HTN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Histatin 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HTN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Histatin 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Histatin 1 en células tumorales con expresión de HTN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.