Histamine H4 Receptor Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402430-ACT

HRH4 codifica il recettore H4 dell’istamina, un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) espresso prevalentemente nelle cellule immunitarie ed ematopoietiche, dove rileva l’istamina e modula la segnalazione infiammatoria. L’attivazione di HRH4 si accoppia principalmente alle vie Gi/o per ridurre i livelli di cAMP e modulare le risposte a valle dipendenti da MAPK, PI3K/AKT e dal calcio, influenzando chemotassi, produzione di citochine e traffico dei leucociti. Attraverso questi processi, HRH4 contribuisce alla regolazione dell’infiammazione allergica e, più in generale, dell’omeostasi immunitaria in tessuti quali pelle, polmone e tratto gastrointestinale. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di HRH4 sono state studiate in condizioni infiammatorie croniche e in fenotipi di malattie associate al sistema immunitario, a supporto della sua utilità come nodo meccanicistico nella ricerca immunologica.

Histamine H4 Receptor Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HRH4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Histamine H4 Receptor Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HRH4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HRH4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Histamine H4 Receptor. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HRH4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Histamine H4 Receptor nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Histamine H4 Receptor nelle cellule tumorali con espressione di HRH4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.