Partículas Lentivirales de Activación (m) hippocalcin: sc-420938-LAC

El gen Hpca de ratón codifica la hipocalcina, una proteína de unión a Ca2+ con motivo EF-hand, enriquecida en neuronas, de la familia de sensores neuronales de calcio, que acopla los transitorios de calcio intracelular con la señalización aguas abajo. La hipocalcina participa en procesos dependientes de la actividad sináptica, incluida la modulación de la excitabilidad de la membrana, la homeostasis del calcio y el tráfico relacionado con vesículas, y se ha vinculado a vías que configuran la plasticidad sináptica a largo plazo en circuitos del hipocampo. Mediante un comportamiento tipo “interruptor calcio–miristoilo” y sus interacciones con socios de señalización neuronal, puede influir en respuestas reguladas por Ca2+ como la señalización de AMPc, la dinámica de receptores y programas de expresión génica dependientes de la actividad. La desregulación de la señalización asociada a la hipocalcina se ha estudiado en el contexto de respuestas neuronales al estrés y fenotipos relevantes para la neurodegeneración, lo que respalda su uso como punto de entrada molecular para investigar mecanismos subyacentes a la disfunción cognitiva y sináptica.

Las partículas de activación lentiviral hippocalcin (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Hpca en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral hippocalcin (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Hpca, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de hippocalcin. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Hpca y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.