Plasmide Double Nickase (h) HIPK2: sc-402003-NIC

La HIPK2 humaine (homeodomain-interacting protein kinase 2) est une kinase sérine/thréonine qui intègre des signaux de stress et de développement en phosphorylant des régulateurs transcriptionnels, dont p53, et en modulant des complexes associés à la chromatine. Elle participe aux réponses aux dommages de l’ADN, aux programmes d’apoptose et de sénescence, ainsi qu’au contrôle transcriptionnel via des voies liées à la signalisation ATM/ATR, à la régulation Wnt/β-caténine et à l’expression de gènes répondant au TGF-β. HIPK2 interagit aussi avec le renouvellement dépendant de l’ubiquitine et la dynamique des corps nucléaires, façonnant des issues d’expression génique dépendantes du contexte. Une activité et une expression dérégulées de HIPK2 ont été associées à une altération du contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire, à des signaux de survie aberrants et à la biologie tumorale, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques sur la stabilité du génome et la transcription adaptative au stress.

HIPK2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HIPK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HIPK2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HIPK2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HIPK2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.