HIP12 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405552-ACT

ヒトのHIP1Rは、ハンチンチン相互作用タンパク質1関連（HIP12）をコードしており、クラスリン被覆ピットをアクチン細胞骨格に連結し、受容体の内在化や膜輸送に関与するエンドサイトーシスアダプターです。HIP12にはクラスリンおよびF-アクチンに結合するドメインが含まれており、小胞形成、カーゴの選別、細胞骨格ダイナミクスの協調を支えます。これらの機能を通じて、HIP12はエンドサイトーシス、細胞シグナルの減衰、ならびに細胞骨格依存的なリモデリング事象を制御する経路に寄与します。HIP1Rのようなエンドサイトーシスアダプターの制御異常は、神経生物学やがん関連表現型に関わるシグナルネットワークおよび細胞恒常性の攪乱と関連することが文献で報告されており、HIP12は機序解明研究に有用な標的となります。

HIP12 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HIP1Rの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HIP12 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HIP1R 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHIP1R転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HIP12の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHIP1R遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHIP12依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHIP1R発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHIP12経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。