Plasmide Double Nickase (h) HIG2: sc-403510-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HIG2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HIG2 Double Nickase (h) et le plasmide HIG2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HILPDA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HIG2 Antibody (G-2): sc-376704
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HIG2 | sc-403510-NIC | 20 µg | $410.00 |
HILPDA code pour la protéine associée aux gouttelettes lipidiques induite par l’hypoxie (HIG2), une petite protéine qui se localise aux gouttelettes lipidiques et dont l’expression est fortement induite par l’hypoxie et des signaux inflammatoires. HIG2 favorise l’adaptation cellulaire au manque d’oxygène en stimulant le stockage des lipides neutres et en remodelant la gestion des acides gras, reliant ainsi la signalisation HIF à la biogenèse des gouttelettes lipidiques et aux réponses au stress métabolique. Cette biologie recoupe des voies qui contrôlent la tolérance au stress oxydatif, la privation de nutriments et l’activation de l’immunité innée, ce qui fait de HILPDA un point d’entrée utile pour étudier la reprogrammation métabolique induite par l’hypoxie. Une expression altérée de HILPDA a été rapportée dans des contextes d’hypoxie tumorale, de polarisation des macrophages et d’inflammation associée aux maladies métaboliques, où la dynamique des gouttelettes lipidiques peut influencer l’état cellulaire et les programmes de survie.
HIG2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HILPDA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HILPDA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HILPDA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HILPDA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.