Partículas Lentivirales de Activación (m) HIF PHD3: sc-431083-LAC

Egln3 codifica la prolil hidroxilasa 3 del factor inducible por hipoxia (HIF PHD3), una dioxigenasa sensor de oxígeno que hidroxila las subunidades HIF-α para promover la ubiquitinación dependiente de VHL y su degradación proteasomal en normoxia. Mediante la regulación de los programas transcripcionales de HIF, HIF PHD3 ayuda a coordinar respuestas celulares que incluyen señalización angiogénica, metabolismo glucolítico, función mitocondrial, equilibrio redox y adaptación a microambientes con bajo oxígeno. En sistemas murinos, la alteración de la actividad de Egln3 se utiliza ampliamente para analizar la dinámica de la vía de hipoxia a lo largo del desarrollo y la remodelación tisular, donde la disponibilidad de oxígeno determina el destino celular y las respuestas al estrés. La desregulación de la señalización HIF–PHD se emplea con frecuencia como marco mecanístico en modelos de isquemia, inflamación, fibrosis y biología tumoral, lo que sitúa a Egln3 como un nodo clave para investigaciones centradas en la vía.

Las partículas de activación lentiviral HIF PHD3 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Egln3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HIF PHD3 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Egln3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HIF PHD3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Egln3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.