Partículas Lentivirales de Activación (h) HIF PHD3: sc-403671-LAC

EGLN3 codifica la proteína 3 con dominio de hidroxilasa de prolina (HIF PHD3), una dioxigenasa sensible al oxígeno que hidroxila las subunidades HIF-α para promover su ubiquitinación dependiente de VHL y su degradación por el proteasoma en condiciones normóxicas. Al ajustar la estabilidad de HIF, PHD3 regula programas transcripcionales de respuesta a la hipoxia que gobiernan la angiogénesis, el metabolismo glucolítico, la eritropoyesis y la supervivencia celular, y se ha vinculado con el control por retroalimentación dentro de la vía celular de hipoxia. La actividad de EGLN3 está influida por la tensión de oxígeno, el hierro y la disponibilidad de 2-oxoglutarato, integrando el estado metabólico con la adaptación transcripcional. La desregulación de la señalización EGLN3/HIF se ha asociado con contextos como la hipoxia tumoral, la biología de isquemia-reperfusión y los microambientes inflamatorios, lo que respalda estudios mecanísticos de la señalización dependiente de oxígeno.

Las partículas de activación lentiviral HIF PHD3 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de EGLN3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HIF PHD3 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción EGLN3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HIF PHD3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo EGLN3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.