Plasmide Double Nickase (m) HIF PHD3: sc-431083-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) HIF PHD3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HIF PHD3 Double Nickase (m) et le plasmide HIF PHD3 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Egln3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) HIF PHD3 | sc-431083-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Egln3* code HIF PHD3 (EGLN3), une prolyl-hydroxylase dépendante du 2‑oxoglutarate et du Fe(II) qui agit comme capteur d’oxygène en hydroxylant les sous-unités HIF‑α, favorisant ainsi leur ubiquitinylation médiée par VHL et leur dégradation par le protéasome. Grâce à cette régulation, PHD3 module des programmes transcriptionnels induits par l’hypoxie qui contrôlent la glycolyse, la signalisation angiogénique, les réponses érythropoïétiques, l’adaptation mitochondriale et la survie cellulaire en conditions de faible tension en oxygène. L’expression d’*Egln3* est induite transcriptionnellement par l’hypoxie et intègre des signaux liés à l’état métabolique et aux espèces réactives de l’oxygène (ROS) pour façonner l’amplitude et la durée de l’activation de la voie HIF. Une dérégulation de la signalisation EGLN3/HIF a été associée dans la littérature à la biologie tumorale, au stress tissulaire lié à l’ischémie, au remodelage vasculaire pulmonaire et aux microenvironnements inflammatoires, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de l’homéostasie de l’oxygène.
HIF PHD3 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Egln3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Egln3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Egln3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Egln3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.