Plásmido Doble Nickase (h) Hic-5: sc-402786-NIC

TGFB1I1 codifica Hic-5 (también conocida como ARA55), un adaptador de adhesión focal que contiene dominios LIM y que integra señales de la matriz extracelular con la remodelación del citoesqueleto y respuestas transcripcionales. Hic-5 se localiza en las adhesiones focales y en el núcleo, donde actúa como andamiaje de complejos de señalización vinculados a la vía de integrina/FAK–SRC, la regulación de las GTPasas de la familia Rho y las rutas de mecanotransducción que coordinan la adhesión, la migración y la dinámica de las fibras de estrés. Es inducible por TGF-β y participa en programas de remodelación dependientes de TGF-β, incluidos efectos específicos del contexto sobre la transición epitelio-mesenquimal y la activación de fibroblastos. La actividad desregulada de TGFB1I1/Hic-5 se ha asociado con la invasión y la biología de la metástasis en células cancerosas, redes de señalización fibrótica y la remodelación del microambiente inflamatorio, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar el control transcripcional dependiente de la adhesión.

Hic-5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TGFB1I1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TGFB1I1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TGFB1I1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TGFB1I1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.