Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
HGF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400433
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- HGF El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico HGF, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HGFα Anticuerpo (H-10): sc-374422
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
HGF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400433 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) es una citocina pleiotrópica secretada que se une al receptor tirosina cinasa MET para regular la comunicación epitelio–mesénquima, la motilidad celular, la supervivencia, la proliferación y la morfogénesis. La señalización HGF–MET activa las vías MAPK/ERK, PI3K–AKT, STAT y las GTPasas de la familia Rho para coordinar la remodelación tisular, la reparación de heridas y el desarrollo de órganos. La expresión desregulada de HGF o la activación aberrante de estas vías se asocia con programas de crecimiento invasivo, interacciones estroma–tumor y microambientes angiogénicos e inflamatorios alterados en múltiples contextos patológicos. Como factor parácrino producido por células mesenquimales, el HGF se estudia con frecuencia en sistemas de cocultivo y de medios condicionados para investigar dinámicas de señalización impulsadas por el microambiente.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO HGF (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HGF en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HGF junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HGF tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HGF.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HGF para la investigación de la señalización de HGF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de HGF críticos para la función de HGF
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HGF para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido HGF CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HGF CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HGF. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HGF (h) y el plásmido HDR HGF (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HGF para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HGF definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.