Plasmide CRISPR/Cas9 KO HGFα/β (m): sc-420849
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- HGFα/β Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique HGFα/β, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HGFα Antibody (H-10): sc-374422
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO HGFα/β (m) | sc-420849 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin *Hgf* code le facteur de croissance des hépatocytes (HGFα/β), un ligand hétérodimérique sécrété du récepteur tyrosine kinase MET, qui coordonne la signalisation épithélio-mésenchymateuse. L’activation de l’axe HGF–MET mobilise les voies MAPK/ERK, PI3K–AKT, STAT et des GTPases Rho afin de réguler la prolifération, la survie, la motilité, la morphogenèse et la réparation tissulaire. *In vivo* comme *in vitro*, la signalisation HGF façonne le développement et la régénération des organes et module le dialogue stroma–épithélium au sein du microenvironnement. Une signalisation HGF/MET dérégulée est largement étudiée dans des modèles de fibrose, d’inflammation et de progression tumorale, notamment l’invasion, les programmes angiogéniques et la dissémination métastatique.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HGFα/β (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hgf dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hgf, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hgf à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HGFα/β.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hgf pour l'étude de la signalisation de HGFα/β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Hgf essentiels à la fonction de HGFα/β
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hgf pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le HGFα/β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HGFα/β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hgf. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le HGFα/β plasmide HDR (m) et le HGFα/β (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hgf pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hgf définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.