Plásmido Doble Nickase (h) HFE: sc-403695-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HFE consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HFE (h) y el plásmido de doble nickasa HFE (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HFE. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HFE Anticuerpo (C-12): sc-514405
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HFE | sc-403695-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) HFE | sc-403695-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HFE codifica una proteína no clásica similar a la del MHC de clase I que se asocia con la β2‑microglobulina y modula la unión al receptor de transferrina para regular la captación celular de hierro. A través de esta interacción, HFE ayuda a coordinar la detección de hierro y la homeostasis sistémica del hierro en hepatocitos, enterocitos y macrófagos, influyendo en la regulación de la hepcidina y en las vías de almacenamiento de hierro. La alteración de la función de HFE modifica el tráfico de hierro y las respuestas al estrés oxidativo, vinculando este gen con fenotipos de sobrecarga de hierro como la hemocromatosis hereditaria y con mecanismos posteriores de daño tisular. Por ello, HFE se utiliza ampliamente como modelo para estudiar el metabolismo del hierro, la señalización sensible a metales y los procesos inflamatorios o fibróticos impulsados por el hierro.
HFE El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HFE en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HFE. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HFE. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HFE alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.