Plásmido CRISPR de Activación (h) HFE: sc-403695-ACT

HFE codifica una proteína similar a las del complejo mayor de histocompatibilidad de clase I que se asocia con la β2‑microglobulina y modula las interacciones con el receptor de transferrina (TFRC) para regular la captación celular de hierro y la homeostasis sistémica del hierro. A través de su influencia en la señalización de la hepcidina (HAMP) y en la detección de hierro en hepatocitos y macrófagos, HFE afecta el almacenamiento de ferritina, la saturación de transferrina y las respuestas al estrés oxidativo. La disfunción de HFE se asocia con fenotipos de sobrecarga de hierro y con alteraciones de la señalización inflamatoria y metabólica en tejidos sensibles a desequilibrios redox. En investigación, HFE constituye un nodo accesible para estudiar vías dependientes del hierro que afectan la función mitocondrial, el metabolismo lipídico y el comportamiento de las células inmunitarias.

HFE El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HFE sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HFE El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HFE en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HFE, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HFE. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HFE y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HFE en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HFE en células tumorales con expresión de HFE silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.