Plásmido CRISPR de Activación (h) HEXIM1: sc-402333-ACT

El gen humano **HEXIM1** (hexamethylene bis-acetamide inducible 1) codifica una proteína reguladora nuclear que limita la elongación transcripcional al secuestrar **P-TEFb** (CDK9–ciclina T) dentro del complejo **snRNP 7SK**, reduciendo así la fosforilación del CTD de la ARN polimerasa II y la liberación de la pausa. A través de este control de la elongación dependiente de CDK9, HEXIM1 influye en programas de expresión génica sensibles a estímulos, en la progresión del ciclo celular y en redes transcripcionales asociadas a la diferenciación. La alteración de la expresión de HEXIM1 o la disrupción de la homeostasis 7SK/P-TEFb se ha relacionado con la desregulación transcripcional observada en contextos proliferativos y de adaptación al estrés, lo que convierte a HEXIM1 en un nodo útil para estudiar mecanismos que conectan señales de entrada con la salida transcripcional a escala genómica. Investigar la función de HEXIM1 apoya la investigación sobre el control de la transcripción, la regulación asociada a la cromatina y vías relevantes para enfermedad impulsadas por dinámicas de elongación aberrantes.

HEXIM1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HEXIM1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HEXIM1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HEXIM1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HEXIM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HEXIM1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HEXIM1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HEXIM1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HEXIM1 en células tumorales con expresión de HEXIM1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.