Plasmide CRISPR d'Activation (h) HEXB: sc-404765-ACT

Le gène humain **HEXB** code la sous-unité bêta de la **β‑hexosaminidase lysosomale**, qui forme des hétérodimères fonctionnels avec **HEXA** ou des homodimères afin de catalyser la dégradation progressive du **ganglioside GM2** et d’autres glycoconjugués. Cette activité enzymatique soutient le renouvellement des macromolécules dépendant du lysosome ainsi que des processus plus larges liés au trafic endo‑lysosomal, aux interactions entre autophagie et lysosome, et au catabolisme lipidique. Une altération de la fonction de HEXB perturbe l’homéostasie des sphingolipides et le stockage lysosomal, associant ce gène à des variants de la **gangliosidose GM2** et à des phénotypes cellulaires neurodégénératifs induits par l’accumulation de substrats. En tant que composant d’une hydrolase lysosomale, **HEXB** est fréquemment étudié dans le contexte de la biologie des neurones et des cellules gliales, du métabolisme lipidique et des réponses au stress liées à un dysfonctionnement lysosomal.

HEXB Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HEXB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HEXB Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HEXB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HEXB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HEXB. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HEXB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HEXB au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HEXB dans les cellules tumorales présentant une expression de HEXB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.