Plásmido Doble Nickase (h) Hex: sc-403827-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Hex consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Hex (h) y el plásmido de doble nickasa Hex (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HHEX. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Hex Anticuerpo (HHE5I261): sc-81284
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Hex | sc-403827-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Hex | sc-403827-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen HHEX humano codifica Hex, un factor de transcripción homeobox que coordina la especificación de linajes y la organogénesis, con funciones destacadas en el patrón del endodermo y el desarrollo hematopoyético temprano. Hex integra programas transcripcionales dependientes del contexto que influyen en las decisiones de destino celular, la proliferación y la diferenciación mediante redes reguladoras que se entrecruzan con vías de señalización del desarrollo como Wnt, BMP y TGF-β. En tejidos maduros, HHEX contribuye a la biología vascular y de las células inmunitarias, y su expresión desregulada se ha vinculado con estados de diferenciación alterados y con circuitos transcripcionales oncogénicos en varias neoplasias malignas. Dado que HHEX funciona como un nodo en redes reguladoras génicas del desarrollo y la hematopoyesis, se estudia con frecuencia para cartografiar el uso de potenciadores (enhancers), las dianas transcripcionales y los estados de cromatina específicos del contexto.
Hex El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HHEX en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HHEX. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HHEX. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HHEX alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.