HES7 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407096

Descripción general

HES7 (hairy and enhancer of split 7) codifica un represor transcripcional bHLH que actúa como componente central del reloj de segmentación durante el desarrollo embrionario humano. Funciona aguas abajo de la señalización de Notch e integra programas oscilatorios de expresión génica que coordinan la somitogénesis, con una regulación estricta del tiempo de transcripción y dinámicas de retroalimentación negativa. La alteración de la actividad de HES7 interrumpe el patrón de los somitas y se ha relacionado con anomalías congénitas de segmentación vertebral, lo que lo hace relevante para el estudio de redes regulatorias génicas del desarrollo. En modelos celulares, HES7 se examina comúnmente por sus funciones en la represión transcripcional, la comunicación cruzada con la vía de Notch y los mecanismos de control de la expresión rítmica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HES7 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HES7 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HES7 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HES7 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HES7.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HES7 para la investigación de la señalización de HES7, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HES7 críticos para la función de HES7
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HES7 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HES7 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HES7 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HES7. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HES7 (h) y el plásmido HDR HES7 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HES7 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HES7 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.