Plásmido CRISPR de Activación (h) HERP: sc-402787-ACT

El gen humano **HERPUD1** codifica la proteína del retículo endoplásmico inducible por homocisteína (HERP), un componente asociado a la membrana del RE de la respuesta a proteínas desplegadas (UPR) que ayuda a mantener la proteostasis durante el estrés del RE. HERP participa en la degradación asociada al RE (ERAD) al favorecer el recambio dependiente de ubiquitina de proteínas mal plegadas y coordinar la comunicación entre la detección del estrés y la eliminación por el proteasoma. Gracias a sus funciones en la señalización de la UPR, el equilibrio redox y el control de calidad, la expresión de HERPUD1 se utiliza con frecuencia como indicador de perturbaciones que afectan la capacidad de plegamiento proteico y la homeostasis de la vía secretora. La desregulación del estrés del RE y de las vías de ERAD se ha implicado en contextos como la neurodegeneración, la disfunción metabólica y la adaptación de células tumorales, lo que convierte a HERPUD1 en un nodo útil para estudios mecanísticos de resiliencia al estrés.

HERP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HERPUD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HERP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HERPUD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HERPUD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HERP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HERPUD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HERP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HERP en células tumorales con expresión de HERPUD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.