Plásmido Doble Nickase (h) HERG: sc-401143-NIC

KCNH2 codifica el canal de potasio humano HERG (Kv11.1) dependiente de voltaje, que conduce la corriente rectificadora retardada rápida (IKr), un determinante principal de la repolarización del potencial de acción cardíaco y de la duración del intervalo QT. La actividad del canal HERG se integra en las vías de excitabilidad y homeostasis iónica al modular la dinámica del potencial de membrana y la temporización del período refractario. Las alteraciones genéticas o funcionales de KCNH2 se asocian con fenotipos de QT largo hereditarios y adquiridos y con susceptibilidad a arritmias ventriculares, y el canal constituye un blanco fuera de objetivo frecuente en estudios de electrofisiología y farmacología de seguridad. Más allá de los cardiomiocitos, la expresión de KCNH2 en contextos celulares excitables y proliferativos respalda investigaciones sobre el tráfico del canal, la regulación del “gating” (apertura/cierre) y el entrecruzamiento entre la señalización de membrana.

HERG El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KCNH2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KCNH2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KCNH2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KCNH2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.