Hepatic Lipase Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403928-ACT

LIPC codifica la lipasi epatica, un enzima lipolitico associato al fegato e all’endotelio che idrolizza trigliceridi e fosfolipidi nelle lipoproteine circolanti, rimodellando così le HDL e le particelle contenenti apoB. Attraverso le sue azioni sulla superficie degli epatociti e nel compartimento vascolare, la lipasi epatica contribuisce alla captazione delle lipoproteine, al trasporto inverso del colesterolo e, più in generale, all’omeostasi lipidica. Variazioni nell’espressione o nell’attività di LIPC sono state associate a profili lipidici plasmatici alterati, inclusi cambiamenti del colesterolo HDL e delle lipoproteine ricche di trigliceridi, collegando questa via a fenotipi cardiometabolici. In quanto regolatore nodale del metabolismo delle lipoproteine, LIPC è spesso studiato nella biologia degli epatociti, nel traffico lipidico e nelle reti trascrizionali sensibili ai nutrienti.

Hepatic Lipase Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LIPC senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Hepatic Lipase Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LIPC nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LIPC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Hepatic Lipase. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LIPC nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Hepatic Lipase nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Hepatic Lipase nelle cellule tumorali con espressione di LIPC silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.