HEMK2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406503

Descripción general

N6AMT1 (también conocido como HEMK2) codifica una metiltransferasa que cataliza la metilación de proteínas, contribuyendo a la regulación de la fidelidad de la traducción y de procesos asociados al ribosoma. HEMK2 se ha vinculado con la metilación de componentes de la terminación de la traducción y del ribosoma, conectándolo con vías de proteostasis y respuestas celulares al estrés que dependen de una síntesis proteica precisa. La actividad alterada de N6AMT1/HEMK2 se ha estudiado en contextos relacionados con la estabilidad del genoma, la señalización de estrés mitocondrial y oxidativo, y el control del crecimiento desregulado, lo que lo hace relevante para trabajos mecanísticos en biología del cáncer y otros trastornos caracterizados por un mantenimiento del proteoma alterado. Su función enzimática y su amplia integración celular respaldan su uso como un nodo para investigar redes de modificaciones postraduccionales y las adaptaciones transcripcionales y metabólicas posteriores.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HEMK2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen N6AMT1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del N6AMT1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de N6AMT1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HEMK2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en N6AMT1 para la investigación de la señalización de HEMK2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de N6AMT1 críticos para la función de HEMK2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de N6AMT1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HEMK2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HEMK2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus N6AMT1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HEMK2 (h) y el plásmido HDR HEMK2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología N6AMT1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana N6AMT1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.