Plasmide CRISPR/Cas9 KO HECTD3 (h): sc-406532

Présentation

HECTD3 code une ligase E3 à domaine HECT qui catalyse le transfert d’ubiquitine sur des protéines cibles, modulant ainsi leur stabilité, leur localisation et la sortie de signalisation. Elle a été associée à la régulation de la signalisation de l’immunité innée et de l’inflammation, notamment via la modulation des voies liées à NF-κB et aux interférons grâce à un contrôle ubiquitine‑dépendant de composants de ces voies. En ajustant la protéostasie et la transduction du signal, HECTD3 peut influencer les réponses au stress cellulaire, la prolifération et l’apoptose. Des programmes d’ubiquitination dérégulés impliquant HECTD3 ont été associés à des phénotypes liés au cancer et à des mécanismes de maladies à médiation immunitaire, ce qui étaye son utilisation dans des modèles de dissection des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HECTD3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HECTD3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HECTD3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HECTD3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HECTD3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HECTD3 pour l'étude de la signalisation de HECTD3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HECTD3 essentiels à la fonction de HECTD3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HECTD3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HECTD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HECTD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HECTD3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HECTD3 plasmide HDR (h) et le HECTD3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HECTD3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HECTD3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.