Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Headpin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409662
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Headpin Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Headpin, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Headpin Antibody (E-1): sc-398857
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Headpin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-409662 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
SERPINB13 codifica l’inibitore umano delle serin-proteasi Headpin, una serpin di clade B (intracellulare) espressa in modo prominente negli epiteli stratificati. Headpin regola la proteolisi inibendo alcune proteasi di tipo tripsina, contribuendo a mantenere l’integrità della barriera epiteliale e l’omeostasi proteasi–antiproteasi durante la differenziazione e il rimodellamento tissutale. Limitando l’attività proteasica aberrante, SERPINB13 può influenzare la segnalazione infiammatoria, la sopravvivenza cellulare e le risposte allo stress associate al danno epiteliale. Un’espressione alterata di SERPINB13 è stata riportata in diverse patologie epiteliali, rendendolo un bersaglio utile per studiare i meccanismi che collegano il controllo delle proteasi alla biologia dei cheratinociti e a fenotipi rilevanti per la malattia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Headpin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SERPINB13 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SERPINB13 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SERPINB13 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Headpin.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SERPINB13 per lo studio della segnalazione di Headpin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni SERPINB13 critici per la funzione di Headpin
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SERPINB13 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Headpin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Headpin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SERPINB13. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Headpin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Headpin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SERPINB13 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SERPINB13 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.