Partículas Lentivirales de Activación (h2) HDGF: sc-402859-LAC-2

El HDGF humano (factor de crecimiento derivado de hepatoma) codifica una proteína nuclear y secretada con unión a heparina que puede actuar como un factor mitogénico y promotor de la supervivencia, con funciones en la progresión del ciclo celular, la regulación transcripcional y procesos asociados a la cromatina. El HDGF está vinculado a redes de señalización que sostienen la proliferación, la migración y programas angiogénicos, y contribuye a las respuestas al estrés y a la remodelación tisular mediante una actividad autocrina/paracrina dependiente del contexto. Se ha informado de una expresión desregulada de HDGF en múltiples cánceres y en patologías fibróticas y vasculares, donde con frecuencia se asocia con fenotipos celulares agresivos y con interacciones alteradas con el microambiente tumoral. La perturbación genética de HDGF respalda estudios mecanísticos de la biología de los factores de crecimiento, de los motivos de translocación nuclear (p. ej., la unión a la cromatina mediada por el dominio PWWP) y del mapeo de vías aguas abajo en modelos de oncogénesis, inflamación y fibrosis.

Las partículas de activación lentiviral HDGF (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de HDGF en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HDGF (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción HDGF, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HDGF. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo HDGF y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.