Plasmide CRISPR/Cas9 KO HCR (h): sc-407960
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- HCR Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique HCR, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HCR Antibody (E-4): sc-365889
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO HCR (h) | sc-407960 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
CCHCR1 code la protéine humaine HCR (coiled-coil α-helical rod), une protéine cytoplasmique et périnucléaire impliquée dans la régulation de la différenciation des kératinocytes, l’homéostasie de la barrière épidermique et l’organisation du cytosquelette. HCR a été associée à des processus influençant le trafic vésiculaire et la prolifération cellulaire, ce qui concorde avec son enrichissement dans la biologie de la peau et des follicules pileux. Les variations génétiques et l’expression altérée de CCHCR1 sont associées à une susceptibilité au psoriasis et à des phénotypes cutanés inflammatoires apparentés, ce qui étaye sa pertinence dans des voies reliant les réponses épithéliales au stress et la signalisation immunitaire. Par conséquent, CCHCR1 est fréquemment étudié dans des modèles de biologie des kératinocytes, de dialogue entre voies de signalisation inflammatoires et de génétique des maladies cutanées.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HCR (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CCHCR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CCHCR1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CCHCR1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HCR.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CCHCR1 pour l'étude de la signalisation de HCR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de CCHCR1 essentiels à la fonction de HCR
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CCHCR1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le HCR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HCR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CCHCR1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le HCR plasmide HDR (h) et le HCR (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CCHCR1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CCHCR1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.