HCN2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420813

Descripción general

Hcn2 codifica el canal 2 activado por hiperpolarización y regulado por nucleótidos cíclicos (HCN2), un canal iónico que conduce la corriente Ih y contribuye a la actividad marcapasos, la excitabilidad de membrana y el disparo rítmico en neuronas y cardiomiocitos. HCN2 integra la hiperpolarización con la señalización de nucleótidos cíclicos, vinculando la dinámica de cAMP/PKA con cambios en el umbral del potencial de acción y la frecuencia de disparo. En el sistema nervioso, HCN2 influye en el procesamiento sensorial y en las oscilaciones de red mediante la regulación de la integración dendrítica y la respuesta sináptica. La desregulación de la función de HCN2 se ha asociado con fenotipos de excitabilidad alterada relevantes para estudios de vías del dolor, mecanismos relacionados con la epilepsia y la biología de la conducción cardíaca en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HCN2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Hcn2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Hcn2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Hcn2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HCN2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Hcn2 para la investigación de la señalización de HCN2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Hcn2 críticos para la función de HCN2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Hcn2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HCN2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido HCN2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Hcn2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HCN2 (m) y el plásmido HDR HCN2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Hcn2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Hcn2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.