Plásmido CRISPR de Activación (h) HCN1: sc-404539-ACT

HCN1 codifica el canal 1 activado por hiperpolarización y regulado por nucleótidos cíclicos (hyperpolarization-activated cyclic nucleotide–gated channel 1), un canal catiónico dependiente de voltaje que conduce la corriente Ih y ayuda a establecer el potencial de membrana en reposo, la integración dendrítica y la descarga rítmica en células excitables. La actividad del canal se modula por la hiperpolarización de la membrana y por nucleótidos cíclicos intracelulares, conectando la señalización eléctrica con vías de segundos mensajeros como la regulación de la excitabilidad dependiente de AMPc. En el sistema nervioso, HCN1 contribuye a la respuesta sináptica y a las oscilaciones de red que moldean el procesamiento sensorial y la cognición. La desregulación de la expresión o función de HCN1 se ha implicado en alteraciones de la excitabilidad neuronal y en fenotipos relacionados con crisis epilépticas, lo que respalda su relevancia en estudios de canalopatías y neurofisiología.

HCN1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HCN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HCN1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HCN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HCN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HCN1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HCN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HCN1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HCN1 en células tumorales con expresión de HCN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.