HBO1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416462-ACT

Das humane Gen **KAT7** codiert die Histonacetyltransferase **HBO1**, ein Enzym der MYST-Familie, das Histon H4 und H3 acetyliert und dadurch die Chromatinzugänglichkeit sowie die Transkriptionskompetenz fördert. HBO1 wirkt in Multiproteinkomplexen, die epigenetische Regulation mit der Lizenzierung der DNA-Replikation koppeln, und unterstützt so den Aufbau des Prä-Replikationskomplexes und die Progression durch die S-Phase. Aufgrund seiner Funktionen in der Chromatin-Remodellierung, der Kontrolle der Genexpression und der Genomstabilität wird KAT7/HBO1 häufig in Signalwegen untersucht, die Zellproliferation, Differenzierung und DNA-Schadensantworten steuern. Fehlregulierte Histonacetylierung und replikationsassoziierte Chromatinzustände unter Beteiligung von HBO1 wurden mit onkogenen Transkriptionsprogrammen und anderen Erkrankungen in Verbindung gebracht, die mit epigenetischer Instabilität zusammenhängen.

HBO1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KAT7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HBO1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KAT7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KAT7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HBO1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KAT7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HBO1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HBO1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KAT7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.