Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HB-EGF Plasmide Double Nickase (m): sc-420827-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HB-EGF Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HB-EGF Double Nickase Plasmid (m) e il HB-EGF Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Hbegf. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HB-EGF Antibody (H-1): sc-365182
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HB-EGF Plasmide Double Nickase (m) | sc-420827-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Hbegf** codifica l’**heparin-binding EGF-like growth factor** (HB-EGF), un ligando di **EGFR/ERBB** ancorato alla membrana che viene rilasciato per via proteolitica generando un mitogeno solubile. La segnalazione di HB-EGF attiva le vie canoniche delle tirosin-chinasi recettoriali, incluse **MAPK/ERK** e **PI3K/AKT**, modulando programmi di proliferazione, sopravvivenza, migrazione e risposta alla ferita in cellule epiteliali e stromali. Attraverso il “shedding” regolato dell’ectodominio e la segnalazione autocrina/paracrina, HB-EGF contribuisce al rimodellamento tissutale e a transizioni dello stato cellulare, come una motilità di tipo mesenchimale. Un’attività deregolata dell’asse **HB-EGF–EGFR** è spesso oggetto di studio in contesti di iperproliferazione, rimodellamento associato all’infiammazione e reti di segnalazione oncogeniche.
HB-EGF Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Hbegf nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Hbegf. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Hbegf. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Hbegf interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.