HB-EGF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400795

Descripción general

HBEGF codifica el factor de crecimiento tipo EGF con afinidad por heparina (HB‑EGF), un ligando anclado a la membrana que puede liberarse mediante desprendimiento proteolítico para señalizar a través de los receptores de la familia EGFR/ERBB. HB‑EGF activa las vías posteriores MAPK/ERK, PI3K–AKT y otras rutas mitogénicas y de supervivencia relacionadas, que regulan la proliferación y migración de células epiteliales y estromales, así como programas de respuesta a heridas. Este eje se estudia con frecuencia en contextos de señalización aberrante de EGFR, incluida la biología tumoral, la remodelación inflamatoria y las respuestas al estrés vascular y cardíaco. La dinámica de expresión de HBEGF también se relaciona con la actividad de metaloproteasas ADAM y con redes paracrinas/autocrinas de factores de crecimiento que moldean los microambientes tisulares.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HB-EGF (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HBEGF en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HBEGF junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HBEGF tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HB-EGF.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HBEGF para la investigación de la señalización de HB-EGF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HBEGF críticos para la función de HB-EGF
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HBEGF para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HB-EGF CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HB-EGF CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HBEGF. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HB-EGF (h) y el plásmido HDR HB-EGF (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HBEGF para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HBEGF definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.