Plásmido CRISPR de Activación (h) HB-EGF: sc-400795-ACT

HBEGF codifica el factor de crecimiento tipo EGF de unión a heparina (HB‑EGF), un ligando anclado a la membrana que puede escindirse proteolíticamente para generar un factor soluble que interactúa con EGFR y ERBB4. La señalización de HB‑EGF activa MAPK/ERK, PI3K–AKT y programas transcripcionales relacionados que regulan la proliferación, la supervivencia y la migración celulares, así como las interacciones epitelio‑mesenquimales. Se ha implicado en la reparación de heridas, la remodelación vascular y la señalización inflamatoria mediante una comunicación cruzada dependiente del contexto con metaloproteasas ADAM y componentes de la matriz extracelular. La expresión desregulada de HBEGF y la activación del eje EGFR se estudian con frecuencia en biología del cáncer, la fibrosis y la fisiopatología cardiovascular como mecanismos que moldean las transiciones de estado celular y las respuestas del microambiente.

HB-EGF El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HBEGF sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HB-EGF El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HBEGF en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HBEGF, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HB-EGF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HBEGF y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HB-EGF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HB-EGF en células tumorales con expresión de HBEGF silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.