HAX-1 Double Nickase Plasmid (m): sc-423888-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HAX-1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HAX-1 Double-Nickase-Plasmid (m) und HAX-1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Hax1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HAX-1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-423888-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HAX-1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423888-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Maus-Hax1 kodiert HAX-1, ein überwiegend mit Mitochondrien und dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes Protein, das das Zellüberleben, die Calciumhomöostase und die Dynamik des Zytoskeletts moduliert. HAX-1 ist an der Kontrolle der intrinsischen Apoptose beteiligt, indem es die Integrität der mitochondrialen Membran und caspaseabhängige Signalwege beeinflusst, und es wurde mit der Regulation der Zellmotilität über Interaktionen mit aktinassoziierten Faktoren in Verbindung gebracht. In hämatopoetischen und immunologischen Kontexten ist eine veränderte HAX-1-Funktion mit Defekten im Überleben und in der Differenzierung von Granulozyten assoziiert, was es für Studien zur Neutrophilen-Homöostase und zu Entzündungsreaktionen relevant macht. Seine breiteren Rollen in Stresssignalwegen und der mitochondrialen Physiologie verbinden HAX-1 zudem mit Mechanismen, die unter zellulärem Stress die Gewebehomöostase und degenerative Prozesse beeinflussen.
HAX-1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Hax1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Hax1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Hax1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Hax1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.