Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
HAUSP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-434244
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- HAUSP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico HAUSP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HAUSP Anticuerpo (H-12): sc-137008
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
HAUSP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-434244 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Usp7 de ratón codifica HAUSP, una proteasa específica de ubiquitina que elimina ubiquitina de reguladores clave de la integridad del genoma y de la transcripción, incluido el eje p53–MDM2, modulando así la estabilidad proteica y la dinámica de la señalización. HAUSP participa en el control de la vía ubiquitina–proteasoma, la respuesta al daño del ADN, el manejo del estrés de replicación y procesos asociados a la cromatina que influyen en la progresión del ciclo celular y la apoptosis. Mediante la desubiquitinación de factores implicados en la señalización de checkpoints y en la reparación, Usp7 contribuye a determinar los resultados tras el estrés genotóxico y la activación de oncogenes. La actividad desregulada de USP7/HAUSP se ha relacionado, en modelos experimentales, con alteraciones en redes de supresores tumorales, el equilibrio de la señalización inmune e inflamatoria y fenotipos más amplios relevantes para el cáncer.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO HAUSP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Usp7 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Usp7 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Usp7 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HAUSP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Usp7 para la investigación de la señalización de HAUSP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Usp7 críticos para la función de HAUSP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Usp7 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido HAUSP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido HAUSP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Usp7. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HAUSP (m) y el plásmido HDR HAUSP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Usp7 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Usp7 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.