Plásmido Doble Nickase (m) Haspin: sc-420703-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Haspin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Haspin (m) y el plásmido de doble nickasa Haspin (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Gsg2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Haspin | sc-420703-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) Haspin | sc-420703-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen murino Gsg2 codifica Haspin, una quinasa atípica de serina/treonina que orquesta la dinámica cromosómica mitótica al fosforilar la histona H3 en la treonina 3, una modificación que favorece el reclutamiento del complejo de pasajeros cromosómicos y contribuye a la cohesión y segregación correctas de las cromátidas hermanas. A través de este eje de fosforilación H3T3, Haspin se integra en redes de señalización centroméricas que implican la actividad de Aurora B, el control del punto de control del huso y la estabilidad de las uniones cinetocoro–microtúbulo. La alteración de la regulación mitótica dependiente de Haspin puede impulsar la inestabilidad cromosómica y la aneuploidía, lo que vincula la función de Gsg2/Haspin con rutas ampliamente relevantes para el mantenimiento del genoma y el estrés proliferativo. En consecuencia, Gsg2 se estudia con frecuencia en la regulación del ciclo celular, la intercomunicación de fosforilaciones en la cromatina y modelos mecanísticos de la fidelidad mitótica en células de mamífero.
Haspin El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Gsg2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Gsg2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Gsg2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Gsg2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.