Haptoglobin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401468-ACT

HP kodiert Haptoglobin, ein sezerniertes Akutphase-Glykoprotein, das freies Hämoglobin mit hoher Affinität bindet, um hämgetriebene oxidative Schäden zu verhindern und nach intravasaler Hämolyse Eisen zu konservieren. Der Haptoglobin–Hämoglobin-Komplex wird hauptsächlich über CD163-positive Makrophagen aus dem Kreislauf entfernt, wodurch HP mit der Regulation der angeborenen Immunantwort, inflammatorischer Signalübertragung und der Redox-Homöostase verknüpft ist. Im Rahmen der Akutphaseantwort wird die HP-Expression durch zytokinvermittelte Signalwege moduliert, darunter IL-6/STAT3 und verwandte transkriptionelle Programme, die die systemische Entzündung koordinieren. Veränderte HP-Mengen und Glykoform-Muster wurden mit hämolytischen Zuständen, entzündlichen Erkrankungen und kardiometabolischen Krankheitsphänotypen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für mechanistische Studien zu Immunmetabolismus und oxidativem Stress unterstreicht.

Haptoglobin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Haptoglobin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Haptoglobin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Haptoglobin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Haptoglobin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.