Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HAI-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423129
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- HAI-2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico HAI-2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HAI-2 Anticuerpo (H-9): sc-398119
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
HAI-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423129 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Spint2 codifica el inhibidor de serinproteasas HAI-2, un regulador de tipo Kunitz asociado a la membrana que limita la proteólisis pericelular al inhibir serinproteasas transmembrana de tipo II como la matriptasa y la hepsina. Al restringir la activación de factores de crecimiento impulsada por proteasas y la modulación del recambio de la matriz extracelular, HAI-2 influye en la integridad de la barrera epitelial, la remodelación tisular y los programas de polaridad celular. En sistemas murinos, la actividad alterada de SPINT2/HAI-2 se utiliza para estudiar el desequilibrio en la relación proteasa–inhibidor asociado a disfunción epitelial y a una señalización estroma–epitelio aberrante. Estos procesos se intersectan con vías que regulan la adhesión, la migración y las cascadas de señalización dependientes de proteasas, relevantes para el modelado de la inflamación y la biología tumoral.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO HAI-2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Spint2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Spint2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Spint2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HAI-2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Spint2 para la investigación de la señalización de HAI-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Spint2 críticos para la función de HAI-2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Spint2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido HAI-2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido HAI-2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Spint2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HAI-2 (m) y el plásmido HDR HAI-2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Spint2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Spint2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.