Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HAI-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404011
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- HAI-1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico HAI-1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HAI-1 Anticuerpo (H-1): sc-137159
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
HAI-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404011 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
SPINT1 codifica el inhibidor del activador del factor de crecimiento de hepatocitos tipo 1 (HAI-1), un inhibidor de serina proteasas de tipo Kunitz anclado a la membrana que limita la proteólisis pericelular en las superficies epiteliales. HAI-1 regula la actividad y la maduración de proteasas como la matriptasa (ST14) y la hepsina, modulando así la remodelación de la matriz extracelular, la integridad de la barrera epitelial y cascadas de señalización de factores de crecimiento, incluida la vía HGF/c-MET. A través de estas interacciones, SPINT1 contribuye a la homeostasis epitelial, la reparación de heridas y el control de la motilidad celular y de programas relacionados con la invasión. El desequilibrio en la regulación de SPINT1/HAI-1 se ha asociado con redes de proteasas alteradas observadas en patologías epiteliales, como el daño inflamatorio y la remodelación asociada al cáncer.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO HAI-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SPINT1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SPINT1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SPINT1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HAI-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SPINT1 para la investigación de la señalización de HAI-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de SPINT1 críticos para la función de HAI-1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SPINT1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido HAI-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HAI-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SPINT1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HAI-1 (h) y el plásmido HDR HAI-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SPINT1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SPINT1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.