HADHB CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403234-ACT

HADHB kodiert die Beta-Untereinheit des mitochondrialen trifunktionellen Proteins, einen zentralen Bestandteil der β-Oxidation langkettiger Fettsäuren, der in Zusammenarbeit mit HADHA die Schritte der Enoyl-CoA-Hydratase und der 3‑Hydroxyacyl‑CoA-Dehydrogenase katalysiert. Dieser Enzymkomplex unterstützt die Energiehomöostase, indem er langkettige Acyl‑CoAs in die Bildung von Acetyl‑CoA einschleust und so den Lipidabbau mit der mitochondrialen Atmung und metabolischen Flexibilität koppelt. Eine Störung der HADHB-Funktion ist mit Erkrankungen der mitochondrialen Fettsäureoxidation und Phänotypen metabolischen Stresses verbunden, darunter eine beeinträchtigte Energieproduktion bei Fasten oder unter Bedingungen hoher Belastung. In experimentellen Systemen werden Expression und Aktivität von HADHB häufig im Kontext des mitochondrialen Stoffwechsels, des Redoxgleichgewichts und lipidvermittelter Signalantworten untersucht.

HADHB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HADHB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HADHB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HADHB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HADHB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HADHB-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HADHB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HADHB-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HADHB-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HADHB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.