Plásmido CRISPR de Activación (h) HADHB: sc-403234-ACT

HADHB codifica la subunidad beta de la proteína trifuncional mitocondrial, un componente central de la β‑oxidación de ácidos grasos de cadena larga que, en conjunto con HADHA, cataliza las etapas de enoil‑CoA hidratasa y 3‑hidroxiacil‑CoA deshidrogenasa. Este complejo enzimático sostiene la homeostasis energética al canalizar acil‑CoA de cadena larga hacia la producción de acetil‑CoA, acoplando el catabolismo lipídico a la respiración mitocondrial y a la flexibilidad metabólica. La alteración de la función de HADHB se asocia con trastornos mitocondriales de oxidación de ácidos grasos y con fenotipos de estrés metabólico, incluida una producción de energía deficiente durante el ayuno o en condiciones de alta demanda. En sistemas experimentales, la expresión y la actividad de HADHB se estudian con frecuencia en el contexto del metabolismo mitocondrial, el equilibrio redox y las respuestas de señalización impulsadas por lípidos.

HADHB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HADHB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HADHB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HADHB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HADHB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HADHB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HADHB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HADHB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HADHB en células tumorales con expresión de HADHB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.