HADHB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403234-ACT

HADHB codifica a subunidade beta da proteína trifuncional mitocondrial, um componente central da β-oxidação de ácidos graxos de cadeia longa que catalisa, em conjunto com HADHA, as etapas de enoil-CoA hidratase e 3-hidroxiacil-CoA desidrogenase. Esse complexo enzimático sustenta a homeostase energética ao direcionar acil-CoAs de cadeia longa para a produção de acetil-CoA, acoplando o catabolismo de lipídios à respiração mitocondrial e à flexibilidade metabólica. A disfunção de HADHB está associada a distúrbios mitocondriais da oxidação de ácidos graxos e a fenótipos de estresse metabólico, incluindo produção de energia prejudicada durante jejum ou em condições de alta demanda. Em sistemas experimentais, a expressão e a atividade de HADHB são comumente estudadas no contexto do metabolismo mitocondrial, do equilíbrio redox e de respostas de sinalização induzidas por lipídios.

HADHB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HADHB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HADHB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HADHB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HADHB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HADHB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HADHB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HADHB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HADHB em células tumorais com expressão de HADHB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.