Plásmido CRISPR de Activación (h) GTSF1L: sc-410333-ACT

GTSF1L (factor 1 similar específico de gametocitos) codifica una pequeña proteína de unión a ARN, enriquecida en la línea germinal, que se cree que participa en la regulación génica postranscripcional. Basándose en su homología con proteínas de la familia GTSF, GTSF1L se asocia con vías relacionadas con piRNA que ayudan a regular los elementos transponibles y a mantener la integridad del genoma durante el desarrollo de las células germinales. Estos procesos se entrecruzan con el silenciamiento de ARN, la regulación de la cromatina y el mantenimiento de la estabilidad epigenética en tejidos reproductivos. La desregulación de los programas de defensa del genoma en la línea germinal y la expresión aberrante de factores de línea germinal en contextos somáticos se estudian con frecuencia como contribuyentes a la inestabilidad genómica y a patrones de expresión tipo antígeno cáncer/testículo.

GTSF1L El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GTSF1L sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GTSF1L El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GTSF1L en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GTSF1L, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GTSF1L. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GTSF1L y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GTSF1L en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GTSF1L en células tumorales con expresión de GTSF1L silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.