G_{α t2} CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401528

Übersicht

GNAT2 kodiert die Alpha-Untereinheit von Transducin (Gαt2), einem heterotrimeren G‑Protein, das in der Phototransduktion aktivierte Opsine mit nachgeschalteten Effektoren koppelt. Nach Stimulation eines GPCR tauscht Gαt2 GDP gegen GTP aus, dissoziiert von Gβγ und moduliert die zyklische Nukleotid-Signalübertragung, um die zelluläre Erregbarkeit und stimulusabhängige Antworten zu formen. Obwohl GNAT2 am besten im Kontext der retinalen Signalübertragung charakterisiert ist, bietet es einen gut zugänglichen Ansatzpunkt zur Untersuchung der GPCR–G‑Protein-Kopplung, der Regulation des GTPase-Zyklus und von Signalabschaltmechanismen, die mit dem cGMP-Stoffwechsel und der Kontrolle von Ionenkanälen verknüpft sind. Genetische Störungen von GNAT2 wurden mit erblichen Sehfunktionsstörungen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für die Modellierung von Defekten in der sensorischen Signalübertragung und von Kompensationsmechanismen in Signalwegen unterstreicht.

Das Gα t2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GNAT2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GNAT2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GNAT2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Gα t2 -Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GNAT2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Gα t2 -Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GNAT2-Exone abzielen, die für die Gα t2 -Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GNAT2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Gα t2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Gα t2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GNAT2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Gα t2 HDR-Plasmid (h) und Gα t2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GNAT2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GNAT2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.