Gα q Double Nickase Plasmid (h): sc-400500-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Gα q Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Gα q Double-Nickase-Plasmid (h) und Gα q Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GNAQ abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Gα q: sc-136181
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Gα q Double Nickase Plasmid (h) | sc-400500-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Gα q Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400500-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNAQ kodiert die Alpha-Untereinheit Gαq des heterotrimeren G-Proteins, einen zentralen Signalüberträger von G‑Protein‑gekoppelten Rezeptoren zur Phospholipase C‑β. Nach Aktivierung fördert Gαq die Hydrolyse von PIP2 zur Bildung von IP3 und DAG, erhöht dadurch das intrazelluläre Ca2+ und aktiviert PKC; dies beeinflusst wiederum die MAPK-Signalübertragung, die Zytoskelettdynamik, Sekretion und Transkriptionsprogramme. Die GNAQ‑abhängige Signalgebung prägt Zellschicksalsentscheidungen in mehreren Geweben und wird häufig im Kontext aberranter, GPCR‑getriebener Wachstums- und Überlebenswege untersucht. Wiederkehrende aktivierende Veränderungen in GNAQ stehen im Zusammenhang mit der Biologie melanozytärer Neoplasien sowie weiteren Erkrankungen, bei denen eine fehlregulierte Calcium/PKC‑MAPK‑Signalgebung zu pathogenen Phänotypen beiträgt.
Gα q Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GNAQ-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GNAQ abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GNAQ-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GNAQ-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.