Gα olf Double Nickase Plasmid (h): sc-401092-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Gα olf Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Gα olf Double-Nickase-Plasmid (h) und Gα olf Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GNAL abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Gα olf Double Nickase Plasmid (h) | sc-401092-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Gα olf Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401092-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNAL kodiert die menschliche olfaktorische G‑Protein‑α‑Untereinheit Gαolf, ein heterotrimeres Gα, das ausgewählte G‑Protein‑gekoppelte Rezeptoren mit der Aktivierung der Adenylylcyclase und der cAMP‑Produktion koppelt. Über die sensorische Signalübertragung hinaus ist Gαolf ein zentraler Signalüberträger in striatalen Neuronen, der dopaminerge und adenosinerge Eingänge integriert, um PKA‑abhängige Phosphorylierungsprogramme und transkriptionelle Antworten zu regulieren. Diese Signalkaskade formt die neuronale Erregbarkeit und synaptische Plastizität über nachgeschaltete Effektoren, darunter CREB und die Modulation von Ionenkanälen. Genetische und funktionelle Störungen von GNAL wurden mit Phänotypen von Bewegungsstörungen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für die Untersuchung von Fehlregulationen des GPCR‑cAMP‑Signalwegs in der Neurobiologie unterstreicht.
Gα olf Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GNAL-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GNAL abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GNAL-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GNAL-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.