Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Gα o Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400897
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Gα o El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Gα o, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Gα o Anticuerpo (A2): sc-13532
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Gα o Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400897 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
GNAO1 codifica la subunidad alfa Gαo de la proteína G heterotrimérica humana, un componente dominante de señalización de la familia Gi/o enriquecido en neuronas, que acopla los GPCR activados a la inhibición de la adenilil ciclasa y a la modulación de canales iónicos. Mediante la regulación de la señalización cAMP/PKA, la actividad de los canales de Ca2+ y K+, y las vías posteriores de MAPK y de liberación de neurotransmisores, Gαo determina la transmisión sináptica, la excitabilidad neuronal y el desarrollo de redes. La alteración de la función de GNAO1 se asocia con fenotipos de trastornos del neurodesarrollo y del movimiento, lo que lo convierte en un nodo clave para investigar la arquitectura de señalización impulsada por GPCR en modelos celulares y neuronales. La alteración experimental de GNAO1 respalda estudios mecanísticos sobre la especificidad del acoplamiento de receptores, la dinámica de segundos mensajeros y las respuestas transcripcionales dependientes de la actividad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Gα o (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GNAO1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GNAO1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GNAO1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Gα o.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GNAO1 para la investigación de la señalización de Gα o, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de GNAO1 críticos para la función de Gα o
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GNAO1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Gα o CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Gα o CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GNAO1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Gα o (h) y el plásmido HDR Gα o (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GNAO1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GNAO1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.