Gα 14 Double Nickase Plasmid (h): sc-404556-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Gα 14 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Gα 14 Double-Nickase-Plasmid (h) und Gα 14 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GNA14 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Gα 14 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404556-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Gα 14 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404556-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNA14 kodiert die heterotrimere G‑Protein‑α‑Untereinheit Gα14, ein Mitglied der Gq/11‑Familie, die aktivierte GPCRs an die Phospholipase C‑β koppelt. Über die PLCβ‑abhängige Bildung von IP3 und Diacylglycerol fördert Gα14 die Mobilisierung von intrazellulärem Ca2+ und die Protein‑Kinase‑C‑Signalgebung und verknüpft so Rezeptorsignale mit der Aktivierung von MAPK/ERK sowie mit Transkriptionsprogrammen, die Proliferation, Differenzierung und sekretorische Antworten steuern. Die Aktivität von GNA14 ist besonders in Zusammenhängen relevant, in denen GPCR‑Signalgebung den Gefäßtonus, endokrine Funktionen und die Aktivierung von Immunzellen reguliert. Fehlregulierte Signalgebung der Gq‑Klasse, einschließlich Veränderungen mit Beteiligung von GNA14, wurde mit aberranter Wachstumssignalgebung und Tumorbiologie in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als Knotenpunkt zur Untersuchung GPCR‑getriebener Signalwege unterstützt.
Gα 14 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GNA14-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GNA14 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GNA14-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GNA14-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.