GSTT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420721

Panoramica

Il gene murino **Gstt1** codifica la glutatione S-transferasi theta 1 (GSTT1), un enzima di detossificazione di fase II che catalizza la coniugazione del glutatione con una gamma di xenobiotici elettrofili e metaboliti endogeni reattivi. GSTT1 contribuisce all’omeostasi redox e alla difesa cellulare contro lo stress ossidativo facilitando l’eliminazione dei prodotti della perossidazione lipidica e di altri intermedi reattivi. La sua attività si interseca con il metabolismo del glutatione, con le vie di risposta alla carcinogenesi chimica e con reti più ampie di segnalazione di elettrofili/ROS che influenzano l’adattamento cellulare allo stress. Le variazioni nella funzione della famiglia GSTT sono spesso studiate nel contesto della sensibilità ai tossici, del danno tissutale associato all’infiammazione e di modelli di biologia tumorale, in cui la capacità di detossificazione può modificare i fenotipi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GSTT1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gstt1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gstt1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gstt1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GSTT1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gstt1 per lo studio della segnalazione di GSTT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Gstt1 critici per la funzione di GSTT1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gstt1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GSTT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GSTT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gstt1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GSTT1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GSTT1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gstt1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gstt1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.