Plásmido Doble Nickase (h) GSTM4: sc-405305-NIC

GSTM4 codifica una glutatión S-transferasa de la clase Mu que cataliza la conjugación del glutatión reducido con compuestos electrófilos, lo que respalda la desintoxicación de fase II y la homeostasis redox. Al metabolizar productos de la peroxidación lipídica e intermediarios xenobióticos, GSTM4 contribuye a la defensa celular frente al estrés oxidativo y químico y ayuda a regular las especies reactivas de oxígeno intracelulares. Su actividad se integra con el metabolismo del glutatión y con programas más amplios de respuesta antioxidante que influyen en la señalización, la función mitocondrial y la supervivencia celular. Las alteraciones en la expresión o función de GSTM4 se han relacionado en la literatura con variabilidad en el manejo de xenobióticos y la tolerancia al estrés, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de respuesta a tóxicos y de remodelación metabólica asociada al cáncer.

GSTM4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GSTM4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GSTM4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GSTM4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GSTM4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.