GSTM2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404795-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GSTM2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GSTM2 Double-Nickase-Plasmid (h) und GSTM2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GSTM2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GSTM2: sc-376486
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GSTM2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404795-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GSTM2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404795-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Glutathion-S-Transferase Mu 2 (GSTM2) ist ein zytosolisches Phase-II-Entgiftungsenzym, das die Konjugation von Glutathion an elektrophile Xenobiotika sowie endogene Produkte der Lipidperoxidation katalysiert und dadurch die Redoxhomöostase und die zelluläre Abwehr gegen oxidativen Stress unterstützt. Als Bestandteil des Netzwerks des Glutathionstoffwechsels trägt GSTM2 zur Biotransformation reaktiver Zwischenprodukte bei und kann die zelluläre Anfälligkeit für oxidativen Schaden und entzündungsassoziierte Signalwege beeinflussen. Unterschiede in der Expression oder Aktivität von GSTM2 wurden mit interindividuellen Unterschieden in chemischer Empfindlichkeit und Stressreaktionen in Verbindung gebracht, und GSTM2 wird häufig in Zusammenhängen untersucht, in denen reaktive Sauerstoffspezies und elektrophile Belastung krankheitsrelevante Phänotypen prägen. In der Tumorbiologie und der toxikologischen Forschung wird GSTM2 zudem hinsichtlich seiner Rolle bei der Modulation von Reaktionen auf Umweltexpositionen und in Arzneistoffwechselwegen untersucht, ohne dass damit klinische Auswirkungen impliziert werden.
GSTM2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GSTM2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GSTM2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GSTM2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GSTM2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.